USP788和CP0903不溶性微粒检测发展历程概况及现有方法介绍

      不溶性微粒的检测对注射用药来讲是必须要检测的一个指标，在很早之前这个指标的检测是没有要求的！今天我们来梳理下UPS788和CP0903对不溶性微粒指标检测的发展过程和未来的趋势，希望可以给广大的制药同行带来些许有用的信息和帮助。也欢迎大家沟通。上海梓梦科技有限公司为您提供全面的粒度和zeta电位分析解决方案。

1.USP788的发展历程

1905 –USP将肠胃外溶液作为药典药物。没有提及颗粒物含量或净度。

1916年NF IV包含6篇注射液专著；然而，没有提到外观。

1936 NF VI 包括净度的定义，定义为“透明度"：

1942年，USP XII和NF VII都试图进一步界定“基本上没有"一词的意图。

1946 USP包括术语“基本上没有"一词。

1949年USP修订委员会去掉了透明度测试，并将其替代为要求“…在注射的准备中应该谨慎行事以防止污染"，“…每次注射在最终容器中都要进行目视检查" 。

1965年 澳大利亚堪培拉国家生物标准实验室出版了微粒标准，澳大利亚次提出限制标准，刺激了美国的制约和监管活动。

1966年FDA大容量肠胃外用药安全研讨会；

1972年澳大利亚对肠胃外用药的Coulter和光阻法计数进行比较；

              NMT=No more than

              NMT 100 颗粒/mL ≥2µm

              NMT 5 颗粒/mL ≥20µm

1974年 外国颗粒标准的修订

      大不列颠

             NMT 1000 颗粒/mL ≥ 2µm

              NMT 100 颗粒/mL ≥ 5µm

      澳大利亚

              NMT 1000 颗粒/mL ≥ 2µm

               NMT 250 颗粒/mL ≥ 3.5µm

               NMT 100 颗粒/mL ≥ 5µm

               NMT 25 颗粒/mL ≥ 10µm

               NMT 2 颗粒/mL ≥ 20µm

1974年 USP于1974年12月提出：

              NMT 50 颗粒/mL ≥ 10µm

               NMT 5 颗粒/mL ≥ 25µm

1974年年底USP发布了LVP标准；

1975年 USPXIX <788>章节使用膜显微镜法测试评估大容量注射的颗粒（大容量是指超过100mL/瓶）。 

1980年 英国药典发布了新的标准，使用电阻法（Coulter）或消光法（HIAC）仪器。

1984年USP修订<788>以区分LVP使用膜显微镜和SVP使用HIAC提出的限度：

1985年USP XXI<788>章节中，小容量肠胃外用药（SVP，100mL和更低体积）中增加一种新的消光（光阻）方法。

1986年1月1日，SVP标准和测试方法成为正式文件。

1990 USP XXII 通过膜定义了新的限制条件

1995 USP 23 <788> 将光阻法改为或方法。显微计数法作为第二法。

判定标准做了修改并沿用至今：

2004年 美国药典USP27对滴眼液新章节<789>做了规定:

欧洲药典（Ph.Eur.）和日本药典（JP）这两个重要的非美国药典组织针对粒子限度将收录USP变更为收录SVI。

Ph. Eur. 在2005年变更为收录 SVI 产品。

JP 是在2006年升级收录SVI产品。

2007年 三个组织统一了<788>方法，USP <788>，EP和JP 等。

2010年 USP粒度研讨会提及Flow Imaging Method用来测试蛋白产品

2017年 USP40收录不溶性微粒检测第三法-微流图像法Flow Imaging method。

2.《中国药典》CP0903对不溶性微粒检测规定发展历程梳理

1985年 《中国药典》收载注射液中不溶性微粒检测方法，至1995年采用显微计数法检查

2000年 《中国药典》增加光阻法为不溶性微粒检测第二法，＞100ml LVP

2005年 《中国药典》将光阻法由第二法改为法，作为方法。SVP+灭菌粉末

2010年 《中国药典》CP0903更新，和国际接轨保持一致。

-至今没有做大的更新。

3.不溶性微粒检测法-光阻法不溶性微粒仪概况介绍

目前光阻法不溶性微粒仪国内外厂家比较多，技术比较成熟，操作软件基本都符合制药行业中21CFR Part11的要求。主要的厂家品牌有美国贝克曼库尔特、德国Cloze、美国PSS、美国PMS，进口各品牌性能上各有优势。国产品牌主要有天津天河和天大天发，近几年有几个国产品牌也相继诞生，产品还有待市场检验。

光阻法不溶性微粒仪原理如下图：

结构比较简单，如图一，激光光源发射激光经过样品池，样品池中的颗粒流经样品池，颗粒会对激光有遮挡作用，使得右侧检测器接收到的激光信号减少，光信号转换成电压脉冲值，颗粒越大遮挡的面就越大，检测到的信号差就越大。从而得到粒度大小和数量。

光阻法不溶性微粒仪适用的剂型主要有，澄清的大输液、小针剂、冻干粉、滴眼剂等。对于一些带有颜色的、粘稠度大的、不透明的样品如注射乳剂、脂质体、白蛋白、混悬剂、mRNA等就没法用光阻法进行测试了，需要采用显微计数法不溶性微粒仪测试。

4.不溶性微粒检测第二法-显微计数法不溶性微粒仪介绍

随着医药行业技术的发展进步，很多特殊复杂制剂的增多，如mRNA、乳剂、脂质体、混悬剂等，越来越多的品种已经无法采用光阻法检测不溶性微粒，需要选择显微计数法（显微镜法）来做测试，USP788称为Microscopic (Membrance Microscope Method)。

从《中国药典》CP0903建立，大部分的用户都是采用常规的反射光源显微镜来做测试，人工进行测量和计数。此种方法的优点是成本低，对于颗粒可以很好的人眼进行识别。缺点也很明显，无法避免人为因素带来的误差，从法规上来看无法实现审计追踪。

鉴于此上海梓梦科技有限公司利用显微镜搭载自动移动平台，通过操作软件来控制平台的移动，对测试滤膜做逐行扫描，对整个滤膜做扫描、拼图、合成为一张完整的滤膜图片做分析，并按照药典规定出具数据报告。

5.梓梦科技MIP-01Z和ZMP930全自动显微计数法不溶性微粒仪介绍：

5.1设备构成

型号ZMP930和MIP-01Z全自动显微计数法不溶性微粒仪主要是由显微镜主机、自动移动平台、操作分析软件构成，有关的具体的操作也欢迎大家

5.2显微计数法不溶性微粒仪需要注意的几个细节：

5.2.1显微镜的选择需要选择反射光源（落射光源）

5.2.2放大倍数要确保是100倍

5.2.3光源角度可调

5.2.4软件符合21CFR Part11要求

5.2.5滤膜的选择

5.2.6测试环境的选择

6.上海梓梦科技ZMP-910全自动显微计数法不溶性微粒仪

型号ZMP910全自动显微计数法不溶性微粒仪在MIP-01Z的基础上，结合用户的反馈，做了全新升级，符合《中国药典》CP0903的检测要求。

设备特点：

1）符合ISO 13322-1静态图像法粒度仪标准要求

2）摆脱原有显微镜结构，将光学放大部分设计成一体

3）软件符合21CFR Part11要求

4）标准的放大倍数100倍

5）自带防尘罩

6）可以给出粒度分布、粒形分布结果

7）按照《中国药典》CP0903、USP788等标准出具报告

8）自定义报告

7.不溶性微粒检测第三法-微流图像法（Flow Imaging）不溶性微粒仪

随着生物医药的发展，对不溶性微粒的检测要求又提出了新的挑战，就是硅油、蛋白自身的聚集的问题，这两种方法会把蛋白本身判定为不溶性颗粒。如此常规的光阻法和显微计数法不溶性微粒仪的测试都存在一定的限度。需要新的微流动态图像法（Flow Imaging）仪器做测试。此种方法目前在USP1788中有收录，而在《中国药典》中尚未收录，此种方法已然是一种趋势，感兴趣的客户可以做些了解。

梓梦科技M3000 微流图像法不溶性微粒仪采用动态图像法原理（Flow Imaging），符合ISO 13322-2标准要求。

产品主要特点有：

1）采用微流图像法（Flow Imaging），无需像显微计数法不溶性微粒仪一样做繁琐的样品过滤等前处理；

2）测试范围宽，可以达到0.5μm-1200μm；

3）采用自动变倍远心镜头，无需更换不同倍率镜头；

4）采用1200万像素的高清智能成像系统，分辨率达4096*3000

5）自动区分蛋白聚集体、硅油、颗粒等

6）给出近30中不同粒度、粒形参数

      今天对于不溶性微粒的检测方法和历史演变过程做了简单的梳理，现有方法的简单介绍。希望可以给大家带来一些帮助，如需要更详细信息或者测试中遇到的各种问题，欢迎大家上海梓梦科技，文中如有雷同或者不对之处，也请大家提出宝贵意见。